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自诱导培养基Auto Induction Medium原理介绍

发布时间:2022-05-08   点击次数:105次

自诱导培养基Auto Induction Medium(AIM),包含LB Broth (AIM), 2x YT Broth (AIM), Terrific Broth (AIM), Super Broth (AIM)。通常,外源蛋白在细菌中表达时常使用IPTG诱导的启动子,如Lac启动子。当细胞密度达到理想值时,通过向培养基中加入IPTG的方法诱导蛋白表达。使用这个自动诱导培养基,不再需要监测细胞密度和添加IPTG。葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖,而被优先代谢,促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽(通常发生在对数期的后期),乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖),而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂,引起乳糖阻遏子从与DNA结合的位点上释放,启动重组蛋白的表达。对于DE3基因型的E.coli中,异乳糖使T7lac启动子去阻遏,并诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式,在细菌培养物生长到某一特定点时蛋白表达自发开始,省掉了监测细胞密度(OD600)和添加IPTG这两个步骤。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比,使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。

自诱导培养基(lac启动子)(Auto-induction Medium)产品及特点
本产品是在pET专用生长培养基的基础上开发而成的,它利用E.coli自身对培养 基中碳源和能源的调控利用机制,实现外源蛋白在细菌达到饱和期后的自动诱发。
具有下列特点:
1. 不需添加任何IPTG或相关诱导物,节约成本。
2. 免去了密切监控菌液密度的过程,尤其适合大规模筛选 。
3. 细菌生长密度远高于IPTG诱导表达系统 。
4. 外源蛋白表达量远远高于IPTG诱导表达系统。
5. 本产品即开即用,操作简单 。
6. 与各种细胞培养容器兼容(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)。

过夜培养自动诱导细胞表达的培养基系统,培养基都可以大程度上提高pET系列和其它IPTG原核诱导表达系统在大肠杆菌中蛋白的表达量,其最大的方便之处在于使用这种培养基不需要对大肠杆菌的生长密度进行检测。因为IPTG会对细胞存在毒性,因此使用了这种不含IPTG的自动诱导体系培养基与传统培养基相比可以使细胞数量和目的蛋白量都大大增加数倍。

这种培养基是基于F. William Studier博士的技术,使用了不同代谢成分提高细胞的生长密度,并自动诱导lac启动子开始转录。Overnight Express Instant TB Medium培养基现在提供三种不同的成分。作为一种粉末装TB培养基它可快速溶解在水中,并进行微波加热和高压灭菌处理。


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