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点击化学在生物分子示踪方面的应用实例

发布时间:2022-10-23   点击次数:221次


点击化学在生物分子示踪方面的应用实例

基于点击化学的理论,科研人员开始设计出各种含有这些配对基团的化学分子模块用于生物分子的动态示踪,如:通过追踪DNA合成状况来评估细胞增殖能力。最初,研究人员多采用放射性标记核苷掺入法,即在DNA合成过程中,掺入氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷([3H]thymidine),合成的DNA也因此具有放射性而被检测出。然而,该方法灵敏度低、检测耗时长并且具有放射性污染的忧患,随后逐渐被基于抗体检测的BrdU(5’-bromo-2’-deoxyuridine)法所代替。


BrdU法改善了前者灵敏度差、效率低等问题,但该方法必须通过DNA变性(如酸变性等)来暴露BrdU表位以供BrdU抗体识别。由于步骤繁多,影响因素较多,该方法的重现性比较差。此外,与其它免疫组化染色一样,BrdU法的染色效果受组织切片大小和抗体渗透性的影响。


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Comparison of BrdU and EdU labeling on the detection of DNA synthesis


于是,Timothy J. Mitchison等人想到了将EdU(5-ethynyl-2‘-deoxyuridine),产品货号:1149-100,这种胸苷类似物混进DNA的合成过程中。与胸苷相比,EdU(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine,产品货号:1149只是将胸腺嘧啶碱基C5位上甲基替换成端炔基。由于引入的基团足够小,不会影响EdU整合到DNA中。此外,随后与EdU端炔基反应的荧光叠氮化物探针也只有抗体分子的500分之一的大小,能够高效穿透组织并直接与新合成的DNA结合操作简单之余还会提高示踪目标的分辨率、改善实验操作的可重复性。


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Reproducibility of EdU labeling (A) and comparison with BrdU (B) in NIH 3T3 cells


自点击化学的概念提出以来,该反应在20年间就被引用了上万次,可见其深远的影响力。诺贝尔奖委员会表示:“点击化学是一种优雅而有效的化学反应,现已被广泛用于药物开发、绘制DNA以及创造更符合实际需求的材料。"


名称:EdU(5-ethynyl-2‘-deoxyuridine)

货号:1149

品牌:ClickChemistryTools

总代:靶点科技

CAS:61135-33-9

分子量:252.23

结构:如下


随着点击化学ClickChemistry的被越来越多的人熟悉和知道,相关应用越来越多。尤其是体内应用点击化学的案例不断涌现。用不了多久,点击化学将在体内研究中百花齐放。ClickChemistryTools提供一站式点击化学研究工具盒,靶点科技携手美国ClickChemistryTools为国人在点击化学研究中添砖加瓦。



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