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悬浮细胞做好免疫荧光的方法Protocol和创新

发布时间:2022-12-18   点击次数:308次

根据细胞培养时是否附着在支持介质上,分为贴壁细胞悬浮细胞

贴壁细胞天生容易贴壁,这为后续实验提供了便利条件。

但是悬浮细胞在培养基中悬浮生长,如何像贴壁细胞一样好操作,一直是大家的梦想。


一 传统的方法:细胞准备与固定

(1)单层生长细胞:取对数生长细胞,用0.25%胰
蛋白酶消化,制成单细胞悬液。将细胞接种到预先放置几张6×22mm盖玻片的培养瓶或培养皿中,置二氧化碳培养箱培养1-3天,待细胞接近长成单层,取出盖玻片,进入PBS(0.01 mol/L,pH7.4)洗2次,然后根据实验目的,选择适当固定剂固定细胞。常用固定剂有:95%乙醇(固定时间10-30min),丙酮(5-10min)等。

(2) 悬浮生长细胞:取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,或用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片,把细胞片浸入95%乙醇或丙酮中固定。

2 将已经固定的细胞玻片放入盖片染色缸,用PBS振洗5min,取出吹干。

3 滴加适当稀释的特异性
抗体,置于湿盒内,37度保温30-60min或度冰箱过夜

4 PBS振洗3次,每次5min,吹干。

5 滴加适当稀释的荧光素标记抗体,置于湿盒内,37度保温30-60min。

6 PBS振洗2次,每次5min,然后用蒸馏水振洗1次。

7 50%缓冲甘油封片。


二 Shi-Fix玻片最新方法


Shi-Fix玻片,可以让我们像贴壁细胞一样对悬浮细胞做免疫荧光,如下是使用Shi-Fix做的实验结果。简单的四部,告别传统的自己涂片,自己甩片,自己烤片等作坊式方法。



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