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Hypoxyprobe产品Pimonidazole使用注意事项

更新时间:2023-04-08   点击次数:533次

Pimonidazole是新型的组织细胞缺氧标记物,Hypoxyprobe(HPI)公司拥有硝基咪唑类化合物特异性抗体,该抗体为公司专有技术,在此基础上Hypoxyprobe公司开发了不同标记的特异性抗体,可用于:利用免疫组织化学,酶联免疫吸附试验和流式细胞仪技术分析对肿瘤细胞分析检测。


Pimonidazole使用注意事项

1. Animal Studies 动物研究

研究正常或肿瘤组织缺氧首先通过静脉注射(intravenous infusion)、腹腔注射(intraperitoneal injection)或口服(oral ingestion)法给Hypoxyprobe-1溶液,剂量为60mg/kg体重。比如,25g小鼠的探针用量为1.5mg/只小鼠。(高达400mg/kg的剂量用于小鼠无可见毒性或引起组织缺氧变化,但60mg/kg以成本给予良好的染色结果)。

给药后,Hypoxyprobe-1分布到包括大脑的所有组织,且仅仅在氧浓度≤14μM(相当于pO2=10mm Hg,37℃)的细胞内与蛋白质巯基形成加合物。除了肿瘤之外,正常组织如肝脏、肾脏和皮肤含pO2等于或低于10mm Hg的细胞,也会结合Hypoxyprobe-1。

2.Tissue cultures 组织培养

通常情况下,细胞悬液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧环境中孵育1-2h。之后细胞离心涂片、固定、FTIC-MAb1和anti-FITC chromogenic secondary染色。


常见问题解答(FAO)

1.Hypoxyprobe-1 探针如何溶解?

Pimonidazole HCl 是弱碱性盐酸盐,水溶性非常好,一般建议溶解于116mg/ml 的中性生理盐水。

2.Pimonidazole HCl剂量是多少?

对于常规的小动物大小比较均一的,例如:小鼠或大鼠,我们推荐:探针用量:60 mg/kg。从30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到,在此范围内的探针用量,不会由于血流效应而导致毒性或氧量的改变。对于体型较大个体,注射剂量依据个体的基础表面积而定。对于人样本,推荐剂量为:0.5 mg/m2,狗样本:0.28 mg/m2

3.Pimonidazole HCl 探针是否能够渗透进入低氧大脑组织或脑肿瘤组织?

Pimonidazole HCl可以自由渗透进入脑和脑肿瘤组织。

4.探针注射后,多久可以进行收获组织?

对于人体组织的一些研究表明,收获组织需要在免疫后15-24小时后检查。探针在血浆中的半衰期是5小时,因此16-24小时相当于3-5个探针半衰期循环。也就是说:在组织检查时:大概有1/8 到1/32 的探针仍存在,冷固定后,这样减少了非特异性染色,且低背景。

另外关于人类肿瘤研究表明,活组织检查应该在免疫后,1.5-4小时,然后组织及时转到液氮固定。这种方法背景也较低。小鼠血浆中的探针半衰期在0.25小时。这种情况下,采取1-2小时收获组织然后采取快速固定方法,可有效的消除背景。

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