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悬浮细胞如何固定做免疫荧光等后续实验?

更新时间:2023-10-21   点击次数:521次

悬浮细胞呈现悬浮状态生长,如何固定?是所有后续实验的第一步,也是关键的一步,也是难倒很多人的的一步。靶点科技悬浮细胞专用固定玻片Shi-Fix,提供全新的痛点解决方案。L-多聚赖氨酸等传统老掉牙的作坊式方法被诟病,被淘汰。

您是否希望悬浮细胞的免疫荧光像贴壁细胞一样容易?现在就是这样!靶点科技Shi-Fix悬浮细胞免疫荧光专用玻片直击痛点。

细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究,相互作用研究和细胞信号转导研究。细胞免疫荧光就是将免疫学方法和荧光标记技术相结合,研究特异性抗原在细胞内的分布。细胞免疫荧光特性高,敏感性强,速度快,主要原理也是利用抗原抗体反映抗原抗体结合后再用荧光标记,通过显微镜下观察来确定某种特异性抗原是否存在。

根据培养的细胞类型,可分为贴壁细胞和悬浮细胞(淋巴细胞,血液的白细胞)。贴壁细胞有天然贴壁的属性,而悬浮细胞不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长。

免疫荧光实验的基础前提就是让细胞能固定在玻片上。悬浮细胞如何贴壁或者固定到玻片上,是业内科研人员面对的一个难题。传统上,或用细胞离心甩片机制备细胞片或直接涂片法制备细胞涂片,然后把细胞片于乙醇或丙酮或多聚甲醛固定。无论甩片还是涂片,都是黑盒子实验。每个人操作手法不一样,即使同一个人操作,每一批实验,也都没法评价细胞片上的细胞固定的情况,而这一步至关重要。盲目而又没底的只能硬着头皮往下做。浪费的不仅是时间,还有抗体等很多试剂。如何解决这些痛点?悬浮细胞免疫荧光专用玻片Shi-Fix Coverslips带来痛点解决方案!

您是否希望悬浮细胞的免疫荧光像贴壁细胞一样容易?现在就是这样!

靶点科技Shi-fix玻片允许悬浮细胞分层或直接作为单层生长。简单,无忧的实验方案,无需离心即可将悬浮细胞固定到载玻片上。只需将细胞添加到载玻片上,等待30分钟,用PBS洗涤未结合的细胞并继续免疫染色(或继续培养以获得所需的细胞密度)。

这些玻片也可用于染色悬浮细胞以进行显微镜检查,或用于固定悬浮细胞以进行共聚焦显微镜检查。更重要的是,如果需要,您还可以在细胞附着在玻片上时刺激它们。您可以像贴壁细胞一样处理非贴壁细胞!


简单四步法固定悬浮细胞

1. 使用 PBS 清洗细胞,并将细胞重新悬浮于 PBS 中(2-5 百万个/ml)

2. 把悬浮细胞专用免疫荧光玻片放置于12孔或者6孔细胞培养板孔里,直接滴加细胞于悬浮细胞专用免疫荧光玻片上(每个玻片上 20-30 万个细胞)

3. 使细胞附着30分钟,有些细胞需要延长附着时间,但不要超过1小时。使用约 2ml PBS冲洗掉未结合细胞(切勿直接垂直滴加PBS到玻片上的细胞,可将 PB滴加于板孔侧边,然后轻轻摇晃 3-5分钟)

4. 在显微镜下检查细胞附着情况,如果需要进一步培养,那么加入 1ml培养基即可;若不培养即可直接固定,染色。



悬浮细胞固定免疫荧光图


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