Prostate cancer 前列腺癌 （PC） 。转移性去势抵抗性 PC （mCRPC） 是 PC 的最后阶段，它对雄激素剥夺疗法 （ADT） 产生耐药性，占 PC 相关死亡的 90% 以上。恩杂鲁胺是第二代小分子雄激素受体 （AR） 拮抗剂，是显着提高 mCRPC 患者生存率的现代抗雄激素药物之一。
基质细胞形成的肿瘤微环境提供外源信号以诱导癌症治疗反应，这通常会导致肿瘤细胞的遗传和表观遗传改变的积累。与原发性肿瘤相比，转移靶向器官在基质细胞、细胞外基质 （ECM） 和细胞因子环境方面具有不同的组织环境 。以前的研究表明，原发肿瘤和转移对化疗的反应之间存在明显差异，这表明癌症治疗耐药性中涉及转移微环境机制。事实上，最近的单细胞转录组学研究支持了这一点，该研究表明，在恩杂鲁胺治疗后，在患者转移性 PC 中观察到基因表达变化而不是特异性耐药克隆的选择。这表明转移微环境可能驱动这些基因表达变化。然而，绝大多数先前的体内转移性 PC 模型 （例如，PC3、C4-2B） 通过肿瘤细胞内在机制对抗雄激素产生耐药性。因此，尽管这些模型可用于研究促进转移的宿主因素，但它们不能用于确定促进抗雄激素耐药的微环境因素。转移性微环境诱导的抗雄激素耐药的机制基础和关键的基质细胞类型在很大程度上是未知的。
骨转移性 PC 占所有转移性病例的 70% 以上，并且与晚期 PC 患者的死亡高度相关。在目前的研究中，我们确定巨噬细胞是骨转移性 PC 中显着富集的关键基质细胞类型，与原发性肿瘤和其他器官的转移相比。使用新开发的雄激素依赖性骨转移性 PC 体内模型，该模型可以区分抗雄激素耐药和转移的过程，我们的数据揭示了 PC 细胞中巨噬细胞诱导伤口愈合样反应的新机制，ECM 和受体基因显着上调。我们的研究确定了巨噬细胞衍生的激活素 A 通过上调纤连蛋白 （FN1）-整合素 α 5 （ITGA5） 和酪氨酸激酶 Src （SRC） 信号级联反应诱导恩杂鲁胺耐药的重要性 PC 细胞。患者转录组数据集中这些关键分子机制之间的强相关性以及与抗雄激素耐药和患者生存率的显着关联进一步支持了这一点。此外，使用新型特异性抑制剂的巨噬细胞耗竭（Clodronate Liposomes，Liposoma）或 SRC 抑制显着阻碍了骨骼中耐药 PC 的生长。总的来说，我们的研究结果阐明了巨噬细胞诱导的伤口愈合反应与转移性疾病中抗雄激素耐药之间的新机制联系，并提出了新的治疗方法。
选择合适的Marker，定义感兴趣的巨噬细胞群体，尤其是定义一群新的功能的巨噬细胞群体。Marker的使用和发现至关重要。这也是将来发好的文献和原创研究重要工作。Iba1 已广泛用于大多数巨噬细胞群的染色，肺泡巨噬细胞除外。本研究中，Iba1与模型中的经典巨噬细胞标志物 F4/80 共定位。
(H) Macrophage depletion by L-Clod inhibits the development of enzalutamide resistance of PC bone metastasis. Representative images of Iba1 whole-mount staining of bone metastasis samples collected on day 18 with indicated treatment.
(I) FACS quantification of percentage of F4/80+ macrophages in total CD45+ cells of bone metastasis samples collected on day 18 with indicated treatment.
(J) Representative BLI of mice from H on day 0 and day 18.
Vehicle and enzalutamide (30 mg/kg body weight), SRC inhibitor eCF506 (20 mg/kg body weight) was given via daily oral gavage; L-Clod/PBS (1 mg/mouse, twice a week) were administered by i.v. injection; DT or control Glu52-DT (25 μg/kg body weight, every other day), anti-Ly-6G depleting Abs (200 μg/mouse, every other day), activin-A receptor inhibitor SB-505124 (5 mg/kg body weight, every other day) were delivered by i.p. injection. In some experiments, mice continuously received doxycycline diet (625 mg/kg). Enzalutamide was synthesized by chemical core at Memorial Sloan Kettering Cancer Center; eCF506 was kindly provided by A. Unciti-Broceta; L-Clod/PBS was from Liposoma; anti-Ly-6G Abs (clone #1A8) were from BioxCell; activin-A receptor inhibitor SB-505124 was from Selleckchem; and DT/Glu52-DT was from Sigma-Aldrich.
注射方式：静脉注射
剂量：200ul，浓度是5mg/ml，也就是1mg
多次给药：是
次数：6次
时相：根据模型发走发展特点，早期三次，Day0，Day4，Day7。晚期三次，Day11，Day14，Day18。对于慢性模型，需要多次注射，如果有模型里面巨噬细胞的时间曲线图，比如数量，功能等评估巨噬细胞的。我们可以精确给药。如果没有，建议多参考文献。
(H) Gating strategy for identification of F4/80+ macrophages, CCR2+ Inflam-Monos, and neutrophils in bone metastasis.
(I) Representative flow cytometry dot plots showing macrophage depletion using liposomal clodronate, shown as the percentage of F4/80+ cells (gated cells) in CD45+ total cells.
对于marker选择，非常重要。比如CD11b，我们需要根据部位，样品类型等因素来使用。比如正常肺脏巨噬细胞，我们就选择CD11c。对于肿瘤样品，我们一般加上CD11b。正常巨噬细胞的异质性，以及肿瘤巨噬细胞TAM的高度异质性，让我们看文献需要多思考。不能照猫画虎。
