中文摘要：
癌症是一种全身疾病，其并发症超出原发肿瘤部位。其中，血栓形成是某些癌症（如胰腺导管腺癌 (PDAC)）和晚期疾病患者的第二大死亡原因。在这里，我们证明了在多种癌症的非转移性肺微环境中，C-X-C基序趋化因子13（CXCL13）-重编程间质巨噬细胞分泌促血栓性小细胞外囊泡（sEVs），我们将其定义为促血栓性生态位（PTN）。这些sEVs包裹集束整合素β2，与整合素αX二聚，并与血小板结合糖蛋白 (GP)Ib 相互作用，诱导血小板聚集。阻断整合素β2可减少sEV诱导的血栓形成和肺转移。重要的是，与没有血栓病史的患者相比，PDAC患者在血栓发生前的等离子体中sEV-β2水平升高。我们发现肺PTN的建立是癌症进展的系统性后果，并确定sEV-β2是血栓形成风险的预后生物标志物以及预防血栓形成和转移的靶标。
英文摘要：
Cancer is a systemic disease with complications beyond the primary tumor site. Among them, thrombosis is the second leading cause of death in patients with certain cancers (e.g., pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC)) and advanced-stage disease. Here, we demonstrate that pro-thrombotic small extracellular vesicles (sEVs) are secreted by C-X-C motif chemokine 13(CXCL13)-reprogrammed interstitial macrophages in the non-metastatic lung microenvironment of multiple cancers, a niche that we define as the pro-thrombotic niche (PTN). These sEVs package clustered integrin β2 that dimerizes with integrin αX and interacts with platelet-bound glycoprotein (GP)Ib to induce platelet aggregation. Blocking integrin β2 decreases both sEV-induced thrombosis and lung metastasis. Importantly, sEV-β2 levels are elevated in the plasma of PDAC patients prior to thrombotic events compared with patients with no history of thrombosis. We show that lung PTN establishment is a systemic consequence of cancer progression and identify sEV-β2 as a prognostic biomarker of thrombosis risk as well as a target to prevent thrombosis and metastasis.
论文信息：
论文题目：
Extracellular vesicles from the lung pro-thrombotic niche drive cancer-associated thrombosis and metastasis via integrin beta 2
期刊名称：Cell
时间期卷：Published online February 11, 2025
在线时间：2025年2月11日
DOI：10.1016/j.cell.2025.01.025
产品信息：
货号：R300
规格：0.5mg
品牌：Emfret
产地：德国
名称：R300抗体，Antibodies for Mouse Platelet Depletion
订购代理：Target Technology（靶点科技）
R300抗体，Antibodies for Mouse Platelet Depletion血小板清除抗体助力癌症转移模型研究，德国Emfret血小板清除抗体见刊于顶刊Cell
Emfret血小板清除抗体R300抗体Antibodies for Mouse Platelet Depletion助力Cell期刊
小细胞外囊泡（sEVs）与血小板的直接相互作用驱动血栓形成
血小板和sEVs在注射小鼠的血液中直接相互作用（图1M和1N）。整合素β2结合凝血级联的组分，包括纤维蛋白和纤维蛋白原，以及在静息和活化血小板上表达的各种配体。我们使用mMap方法鉴定了sEV β2的血小板配体（图6J）。GPIb亚基α和β（Gp1ba和GP1bb）在黑色素瘤和PDAC小鼠肺sEVs的整合素β2-血小板相互作用组中显著富集（图6K）。其他已知的β2配体，包括细胞间粘附分子1（Intercellular Adhesion Molecule 1, ICAM-1）、GPIIb/IIIa和凝血酶受体PAR4，在这种相互作用组中不富集。我们用单分子力谱（single-molecule force spectroscopy, SMFS）验证了这一点，该方法计算了从正常肺或黑色素瘤或PDAC小鼠（非）转移肺的固定sEVs表面分离配体涂层原子力显微镜（原子力显微镜）顶端所需的皮牛顿力范围（图6L）。血栓形成前sEVs与GPIbα包被端的相互作用比与ICAM-1包被、GFP包被（阴性对照）或未处理端的相互作用强得多（图6M）。此外，来自（非）转移性、携带PTN的肺的sEVs与GPIbα包被端的相互作用比来自正常肺的sEVs强得多（图6N）。在与GPIbα端结合之前，将sEVs与抗β2抗体预先孵育，降低了sEVs与GPIbα之间的相互作用力（图6O）。我们还验证了GPIbα包被端与固定化重组αXβ2蛋白结合（图6P）。
GPIb与其典型配体血管性血液病因子的结合引发一系列事件，包括PS暴露在血小板膜上和TF/FVIIa/FXa凝血酶原复合物的组装，最终导致凝血酶的生成和纤维蛋白原的裂解为了确定sEV-β2是否启动了同样的级联反应，我们将来自B16F10转移瘤肺的亚致死量的sEVs注射到C57BL/6J小鼠中，然后采血，用PS结合膜联蛋白V染色血小板。我们在注射sEV后1min内观察到循环血小板中PS暴露的峰值（图6Q和6R）。同样，与载体或胶原刺激相比，携带转移的肺sEVs与血小板的体外孵育结果明显更高的膜联蛋白V结合（图S7B和S7C）。我们还观察到，在注射促血栓形成的sEVs之前，与PBS相比，在接受膜联蛋白V处理的小鼠中，生存期延长，血小板计数较高（图6S和6T），提示血小板PS暴露是sEV诱发血栓形成的必要步骤。为了排除PS+sEV作为EV相互作用血小板上PS的来源，我们将甲醛固定或肝素处理的血小板与来自B16F10或KPC4662转移肺的sEVs孵卵，未观察到血小板表面膜联蛋白V结合增加（图S7D-S7F）。为了进一步排除sEVs通过内吞作用向血小板表面提供PS并重新分布到细胞质膜的可能性，血小板在sEVs孵育前用amiloride（微胞吞作用抑制剂）或chlorpromazine（网格蛋白依赖性内吞作用抑制剂）处理。在B16F10和KPC4662转移肺的胶原或sEV应答中，两种抑制剂均不影响血小板活化（CD62P+血小板）或PS暴露（膜联蛋白V+血小板）（图S7G-S7J）。与血小板孵育的sEV的dSTORM进一步表明，大多数PS定位于血小板表面，而不是血小板结合的sEVs（图S7B），表明PS暴露是由sEV结合诱导的典型血小板活化引起的。
接下来，我们测试了功能TF/FVIIa/FXa凝血酶原复合物是否在与PS结合的sEVs表面形成，暴露血小板供凝血酶生成。dSTORM成像显示与血小板孵育的促血栓sEVs表面的FVII和FX与TF存在关联（图S7K）。用显色底物补充富血小板血浆表明，对来自B16F10转移瘤肺和重组小鼠TF（rmTF，阳性对照）的sEVs产生FVIIa、FXa和凝血酶，但对来自B16F10细胞、原发肿瘤或正常肺的sEVs没有反应（图6U）。此外，在与血小板孵卵前，通过TF阻断抗体或TF通路抑制剂（TFPI）对B16F10转移肺sEVs进行TF功能阻断并不能阻止PS暴露在血小板上，而β2和TF阻断均可降低血小板聚集（图S7L-S7N）。这表明TF是sEV诱导血栓形成所必需的，但作用于sEV-β2的下游。综上所述，这些数据表明sEV αXβ2和血小板GPIb之间的直接相互作用启动了血小板激活级联反应，涉及血小板表面PS的呈递，促进TF介导的FVIIa、FXa和凝血酶的生成，导致纤维蛋白沉积和血栓生长（图6V）。
我们还测试了阻断GPIb或其他血小板配体是否能阻止sEV诱导的血小板聚集。体外，清除血小板GPIbα（R300抗体，小鼠；6D1抗体，人）和抑制凝血酶（肝素），但不抑制ICAM-1（抗ICAM-1抗体），GPIIb/IIIa（eptifitide，小鼠）；7E3抗体（人），或凝血酶受体蛋白酶激活受体（protease-activated receptor, PAR）4（BMS986120），阻止黑色素瘤/PDAC小鼠或肺转移患者肺转移的sEVs聚集血小板（图6W、6X和S7O）。同样，通过膜联蛋白V处理（图6S和6T）和通过肝素或水貂素产生凝血酶（图6Y和6Z）在体内抑制PS暴露，可以预防来自B16F10转移肺的sEVs小鼠的致死性血栓形成和血小板减少，而eptifibatide或aspirin（COX-1/2抑制剂）治疗则没有。β2阻断剂在预防血栓形成方面与肝素一样有效，但肝素与抗β2阻断剂没有协同作用（图6Y和6Z）。总之，这一实验证据支持β2+sEV诱导血栓形成需要血小板PS暴露和凝血酶生成（图6V）。
