活体成像技术（optical in vivo imaging）目前主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术，生物发光法是基于荧光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化学发光的原理，将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内，与后期注射入体内的底物发生反应，利用光学系统检测光强度，间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域，常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立，并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。
常见的荧光素酶有两种，分别是萤火虫荧光素酶（firefly luciferase，编码基因是luc）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，编码基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下，底物被氧化发光（不同底物光的颜色和波长不同），当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。
D-Luciferin（D-荧光素），D-Luciferin：常见的三种
1.D-Luciferin, Sodium Salt/D-荧光素钠盐、
2.D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐
3.D-Luciferin Firefly,free acid/D-萤火虫荧光素
常用且代表性产品为D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐，货号是122799，品牌是PerkinElmer/Revvity。现货代理商是靶点科技。常年现货，随时发货。技术咨询和产品说明书联系我们技术部。
122799品牌PerkinElmer/Revvity小动物活体成像底物操作使用
D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐
分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O
分子量：320.32 g/mol
应用：
1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；
2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；
Protocol 1：In Vitro Bioluminescent Assays/ 体外生物发光检测
1）配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
2）用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液，配制工作液(终浓度150μg/mL)。
3）去除培养细胞的培养基直至无残留。
4）图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行IVIS成像系统图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。
Protocol 2：In vivo analysis in mice / 小鼠活体成像分析
1）用无菌的DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL)，0.2um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。
2）按10 μL/g体重的浓度向每支小鼠注射相应量的15mg/mL荧光素溶液；
3）腹腔注射10-15 min后，IVIS成像系统进行成像分析。（对每只动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间）
