免疫荧光(IF)是一种定位检测手段，它不仅能显示蛋白在细胞内的定位，还能输出令人惊奇的彩图。越来越多的期刊将IF图作为关键数据，由此可见IF在科学和美学上的吸引力。细胞免疫荧光(IF-IC)需细胞生长/附着在玻璃载玻片上进行，在进行清洗、固定、破膜和染色时，细胞必须附着足够牢固。
悬浮细胞固定免疫荧光中的挑战
由于悬浮细胞不依赖支持物表面生长，其在玻片上的粘附是一大挑战。传统离心甩片或涂片法制备的细胞片存在细胞分布不均或固定不牢的问题，影响后续染色和显微观察。IF-IC通常不作为悬浮细胞的检测手段，这是因为悬浮细胞粘附玻片能力的不足仍是一大难题。
一般贴壁细胞粘附在包被的玻片上，但悬浮细胞并不适合，在科学刊物中避免使用悬浮细胞IF-IC的倾向非常明显。但若您研究某个蛋白在悬浮细胞中的表达，您能将悬浮细胞牢固地粘在盖玻片上IF-IC吗？首先，您可使用特殊的离心柱和离心机使细胞粘附在玻片上。您也可以先对悬浮细胞进行固定、破膜、染色和清洗，最后将它们粘附在包被玻片上。这两种方法都需复杂步骤，对于特定细胞需优化条件。如果能让悬浮细胞粘附在玻片上，让它们能像贴壁细胞一样IF-IC，一直是一个痛点？
悬浮细胞固定免疫荧光玻片解决方案
为克服以上挑战，靶点科技联合Shikhar开发出专门的悬浮细胞免疫荧光专用Shi-fix玻片，您只需添加悬浮细胞、无需离心即可将细胞牢固地粘附在玻片，后续可对粘附细胞进行特定刺激。悬浮细胞可在玻片上单层生长，后续可像贴壁细胞般进行IF-IC，显著简化实验流程并提高染色效率。
悬浮细胞固定免疫荧光玻片操作步骤
1. 用PBS清洗收集的悬浮细胞，并用PBS将其重悬为2~5×106/mL浓度的细胞悬液；
2. 为便于操作，将Shi-fix™玻片放在12孔板中。将细胞悬液滴加Shi-fix™玻片上(2~3×105个细胞/玻片)，体积控制在100ul，具体看样品细胞总量；
3. 将含Shi-fix™玻片的12孔板放在水平台面上，室温静置让细胞附着20~30分钟(对于某些类型的细胞，孵育时间越长附着效果越好，但不要超过1小时)；
4. 向含Shi-fix™玻片的12孔板两侧边缘加入2 mL PBS(不可直接滴到玻片)，轻柔摇动3~5分钟清洗未粘附的细胞(可放置水平摇床上缓慢摇动)。
5. 显微镜检查细胞附着情况。如需进一步培养，加入1mL培养基；或者直接进行固定、破膜和免疫荧光染色。
悬浮细胞固定免疫荧光玻片数据图片
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