小鼠造模:
选用雌性C57BL/6J小鼠(6–8周龄),通过左侧单侧股动脉及股静脉结扎术诱导后肢缺血模型。
氯膦酸盐脂质体ClodronateLiposomes清除骨骼肌肌肉巨噬细胞清除方案:

通过结扎股动脉/静脉,对C57BL6/J小鼠的左侧胫骨前肌(TA)施加缺血性损伤。为了耗竭单核细胞/巨噬细胞,从手术前2天开始,对小鼠给予荷兰Liposoma氯膦酸盐(clodronate)或作为对照的PBS脂质体(Liposoma)处理。
给药时间线:

巨噬细胞耗竭实验方案:
氯膦酸盐脂质体(Clodronate liposomes)及PBS脂质体均购自Liposoma公司。具体给药方案如下:
•静脉注射(眼眶后注射):于手术前2天给予70 μL脂质体进行眼眶后静脉注射;此后,分别于术后第1天及第5天再次给予相同剂量(70 μL)的注射(具体流程见图S1A)。
•局部肌肉注射(胫骨前肌内注射):于手术前1天,向缺血侧胫骨前肌(TA)肌内注射10 μL脂质体;此后,分别于术后第2天及第7天再次进行同样剂量(10 μL)的局部注射。
清除效果检测:

图S1. 氯膦酸盐清除单核/巨噬细胞并抑制肌肉再生。
(A) 实验设计方案,展示了在手术诱导缺血及肌肉评估的时间轴上,氯膦酸盐和PBS(磷酸盐缓冲液)的处理安排。
(B-D) 术后第9天,通过流式细胞术定量分析胫骨前肌(TA)中CD45⁺免疫细胞中以下细胞的比例:
-(B) 巨噬细胞(CD11c⁻/CD11b⁺/Ly6G⁻/Ly6C⁻/F4/80⁺)
-(C) 单核细胞(CD11c⁻/CD11b⁺/Ly6G⁻/Ly6C⁺/F4/80⁻)
-(D) 单核/巨噬细胞(CD11c⁻/CD11b⁺/Ly6G⁻/Ly6C⁺/F4/80⁺)
(E) 术后第9天,从缺血后肢分离的胫骨前肌(TA)的重量,分别经PBS-脂质体(对照组,黑色柱)或氯膦酸盐-脂质体(白色柱)处理。
(F) 胫骨前肌(TA)重量对小鼠体重的标准化比值。
(G) 手术诱导缺血后第9天的小鼠体重。
所有数据均以 均值 ± 标准误(SEM) 表示,每组 7只小鼠。
论文信息:
论文题目:Functional muscle recovery with nanoparticle-directed M2 macrophage polarization in mice
期刊名称:PNAS
时间期卷:115 (42) 10648-10653
DOI: 10.1073/pnas.1806908115
产品信息:
货号:CP-010-010
规格:10ml+10ml
品牌:Liposoma
产地:荷兰
名称:Clodronate Liposomes&Control Liposomes
办事处:靶点科技
Clodronate Liposomes氯膦酸盐脂质体清除肌肉巨噬细胞。荷兰Liposoma巨噬细胞清除剂ClodronateLiposomes见刊于PNAS:通过纳米颗粒引导M2型巨噬细胞极化实现小鼠功能性肌肉恢复。

Liposoma巨噬细胞清除剂Clodronate Liposomes氯膦酸二钠脂质体清除巨噬细胞的材料和方法:
In vivo macrophage depletion
Macrophage Depletion. Clodronate and PBS liposomes were purchased from Liposoma (SKU: LIP-01). Liposomes (70uL) were administered retro-orbitally 2 days before surgery, and again on days 1 and 5 after surgery (Fig. S1A); 10uL were also administered intramuscularly into the ischemic TA 1 day before surgery, and again on days 2 and 7 after surgery.
巨噬细胞清除材料和方法文献截图:

