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单核巨噬细胞功能的检测正确步骤介绍

发布时间:2022-01-13   点击次数:20次
  单核巨噬细胞包括骨髓中的前单核细胞、外周血中的单核细胞、以及组织内的巨噬细胞(Mφ)。Mφ来源于血液中的单核细胞,而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。
  操作方法:
  (1)分离单核细胞,用Hanks液(pH7.2)调整为2~3×105细胞/ml;
  (2)将趋化因子液25μl加入趋化小室的下室。将滤膜光泽的一面朝向趋化因子盖在孔上,并将滤膜左上方剪去一小角;
  (3)盖上趋化小室的上室部分,用固定器夹紧;
  (4)将单核细胞悬液50μl注入上室。操作时不能产生气泡,因气泡妨碍细胞的移动;
  (5)各孔注入单核细胞悬液后,盖以25mm×80mm的载玻片,覆盖全部孔。在37℃,5%CO2温箱中静置90min诱导细胞趋化移动;
  (6)从温箱中取出多孔趋化小室;松开固定器,将小室上、下倒置放在预先准备好的纸垫上,取下滤膜;
  (7)将事先切下一角的滤膜一边用大铗子固定,另一侧用小铗子夹好;
  (8)将朝向单核细胞的滤膜面(即无光泽面朝下)浸入生理盐水盘内,将大铗子一边的滤膜从液体中轻轻拉起(与容器呈30o角),即可将未移动的细胞从滤膜上洗脱下来;
  (9)将滤膜光泽面朝上,贴在事先涂有蛋清甘油(甘油与蛋清等量混合而成)的载玻片(40mm×80mm)上,冷风吹干滤膜后,用甲醇固定,进行Giemsa或瑞氏染色;
  单核巨噬细胞的副作用:
  1、对本品过敏者禁用。有过敏倾向者,慎用。
  2、发热、骨痛、肌痛、头痛、腹泻、无力及皮疹等,亦偶有心律失常及呼吸困难等。
  3、在化疗和放疗前后24小时内,不可使用本品。
  4、本品可能是骨髓恶性肿瘤生长因子,具有骨髓特征的恶性肿瘤病人应慎用。
  5、定期进行白细胞分类计数,当白细胞>50×109/L,中性粒细胞计数>20×109/L时应停药。
  6、肝、肾功能不全、体液潴留者慎用。
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