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肝脏巨噬细胞等细胞群免疫分析和细胞清除方案

发布时间:2022-11-06   点击次数:222次

肝脏是一个复杂的器官,由多种细胞类型组成。 其中大部分(60-80%)是实质细胞——肝细胞。 其余细胞形成异质的非实质细胞 (NPC) 群,主要由肝内皮细胞 (LEC)、巨噬细胞(KF),肝星状细胞 (HSC) 和免疫细胞组成。 肝内免疫细胞是 NPC 突出的成分(高达 50%),由 T 细胞(CD8+ 和 CD4+)、B 细胞、自然杀伤 (NK) 和自然杀伤T (NKT) 细胞、中性粒细胞、单核细胞和树突状细胞 (DC) 和巨噬细胞的各种亚型组成。 肝脏免疫细胞的相对组成因生理条件和物种而异,例如,小鼠肝脏中的 NKT 细胞比人类多。 肝脏免疫细胞组成不同于淋巴器官或血液,因为肝脏富含 CD4+ T 细胞、NK、NKT 和 γ δ (γδ) T 细胞。细胞比例分布参考如下图。

肝脏细胞分布比例.jpg


一般来说,肝脏主要是致耐受性器官,对于预防对饮食和肠道菌群的炎症反应很重要。 因此,NPC 积极促进免疫耐受,例如,肝细胞、枯否细胞 (KC) 和 LEC 诱导 T 细胞无反应。 此外,肝窦LEC (LSEC) 产生称为 LSECtin 的凝集素,可触发 CD8+ T 细胞耐受。 此外,KC 分泌抗炎细胞因子白细胞介素 10 (IL10) ,肝脏驻留的 NK 细胞可通过与免疫检查点通路的相互作用抑制 T 细胞。 在某些病理条件下,例如感染、炎症性疾病或癌症,肝脏免疫细胞的分布或功能可能会发生变化。 这可能导致潜在的不平衡和免疫细胞串扰的改变。

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为了更好地了解影响肝脏的各种病理,需要对常驻/浸润性免疫群体进行分离、免疫表型分析和量化。 目标是获得高产量的单细胞悬液,同时仍保留抗原/表位谱(最小表位降解)并为后续下游应用保留细胞活力。为了避免存在于血液中免疫亚群中的肝脏交叉污染,肝脏的原位灌注是通过腔静脉或门静脉进行的。 另一个关键步骤是正确处理肝组织。 组织解离可以通过机械破坏、使用胶原酶的酶消化或两种方法的组合来进行。 对于肝脏免疫细胞表型分析,需要从获得的匀浆中去除肝细胞,因为它们可能会干扰以后的下游免疫分析。 可以通过多个离心步骤或通过 Percoll 或 Iodixanol 密度梯度进一步纯化细胞悬液。 然而,这个过程既费时又费材料。 此外,纯化方法的苛刻条件也可能影响用于任何下游应用的细胞的活力和/或功能。

小鼠肝脏灌注方案:

(A) 揭开和拉伸门静脉以进行灌注。 (B) 肝灌注。 (C) 渐进式灌注肝脏。 (D) 解离的材料准备。 带有细胞培养基的 C 管,含解离肝脏的酶。 (E) 肝脏与解离混合物一起放入 C 管中。 (F) 解离后的肝脏匀浆。 (G) 分离组织的滤液。 (H) 基于密度梯度的细胞纯化(细胞悬液顶部的碎片去除溶液层;离心前)。 (I) 获得的细胞被残留的红细胞污染。 (J) 去除红细胞后的最终NPC。

肝脏灌注.png

小鼠肝脏流式检测Marker方案:

小鼠肝脏巨噬细胞清除方案:

LIPOSOMA的ClodronateLiposomes氯膦酸盐二钠脂质体(货号:CP-005-005)清除肝脏巨噬细胞,频频见于Cell,Nature和Science。详细文献可以联系靶点科技技术支持索取全文。清除单核巨噬细胞是研究巨噬细胞体内功能的重要工具。

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