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BroadPharm寡核苷酸探针偶联抗体注意事项

发布时间:2023-01-07   点击次数:204次

寡核苷酸可以通过硫醇-马来酰亚胺和腙偶联方法与抗体/蛋白质偶联。硫醇-马来酰亚胺方法通常使用双功能接头(例如 SMCC)进行。然而,SMCC修饰的蛋白质极不稳定,并且经常自反应,因为它通常含有胺和硫醇基团,导致大量的同源交联。当存在其他硫醇基团时,共轭键可交换。在腙偶联方法中,共轭反应基于肼和醛之间的反应。尽管使用了催化剂,但这种方法的收率很低。分子的大小和官能团的不可接近性导致产量低。此外,联动稳定性也是一个问题。


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首先,抗体与LINK NHS酯反应,将LINK引入抗体中。此外,胺修饰的寡核苷酸与MAGIC NHS酯反应,将MAGIC引入寡核苷酸结构中。其次,在纯化活化后的寡核苷酸和抗体后,它们立即相互反应,产生具有稳定环连接的抗体-寡核苷酸偶联物。


原理示意图:


注意事项:

1.单链寡核苷酸的碱基长度是10-120个之间

2.双链寡核苷酸的碱基长度是80个以内

3.寡核苷酸探针在合成时需要修饰,合成时备注好

4.待偶联抗体或者蛋白的保存在PBS里面,浓度不低于1mg/ml。一般1-10mg/ml均可

5.活化后的寡核苷酸和活化后的抗体都要尽快使用,不要超过2小时


产品使用已发表文献:

1.McMahon NP, Jones JA, Kwon S, et al. Oligonucleotide conjugated antibodies permit highly multiplexed immunofluorescence for future use in clinical histopathology. J Biomed Opt. 2020;25(5):1-18. doi:10.1117/1.JBO.25.5.056004

2.Wiener, J., Kokotek, D., Rosowski, S. et al. Preparation of single- and double-oligonucleotide antibody conjugates and their application for protein analytics. Sci Rep 10, 1457 (2020). doi.org/10.1038/s41598-020-58238-6


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