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抗体寡核苷酸偶联AOC技术的基础研究应用

更新时间:2023-05-28   点击次数:472次

药物开发领域里,寡核苷酸已经广泛应用于靶向基因治疗的研究。自2018年1月起FDA已批准多款产品上市,早期批准的产品以皮下和静脉内给药为主,皮下施用的Kynamro利用寡核苷酸在肝脏和肾脏中积累的趋势;静脉内给药的Exondys 51利用杜氏肌营养不良患者肌肉细胞摄取增加的趋势。


基础研究中,低丰度蛋白怎样能进行精确和有效检测?抗体-寡核苷酸 (Ab-oligo) 偶联物技术,是一个不错的选择,现已被用于从诊断到治疗的众多应用中。Ab-oligo 偶联物在强化多项生物技术方面发挥着重要作用,这些技术包括免疫学和蛋白质组学研究、生物标志物的发现、临床诊断(包括即时护理)及其他新型技术。因为寡核苷酸具有多个官能团,所以抗体可以通过氨基酸残基轻松地与寡核苷酸偶联,因此适用于大多数体外应用。


抗体-寡核苷酸偶联物应用

1.免疫聚合酶链反应 (immuno-PCR)

与 ELISA 类似,免疫 PCR 也是一项利用抗体检测和定量混合样本中特定抗原(分析物) 的强大技术。但是,在免疫 PCR 中,Ab-oligo 偶联物会与固定分析物结合,然后通过 RT-PCR 使附着的 DNA 扩增。

在免疫 PCR 中使用 Ab–oligo 偶联物,可以提高蛋白检测和定量的灵敏度;由于它融合了抗体的检测特异性RT-PCR 的核酸检测灵敏度,因此明显优于一般的 ELISA 法。20 多年来,将免疫检测与 RT-PCR 进行结合已成为一项标准技术。

由于免疫 PCR 具有强大的扩增能力,而且特异性和灵敏度更高,高出 ELISA 100-10,000 倍,因此检测的下限更低,扩增产物可以通过凝胶电泳进行观察,从而确定结合分析物是否存在。

2.多重检测开发

多重蛋白检测有助于定量使用通用捕获技术同时测定多个样本中的多种目标分析物,从而减少工作流程和样本量问题。但是,这种检测方法受到检测特异性、灵敏度和通量等因素的限制。

开展多重免疫检测的方法有很多,大致可分为两类:在固体表面固定,每种分析物在独立的空间内进行检测;固定于磁珠或颗粒上,每种分析物在不同的磁珠/颗粒上进行检测。如今,多重蛋白检测技术利用 DNA 两条互补链之间的特异性结合,将每种同源物对应的一条链(分析物)固定在固体支持物上,例如微量滴定板。将 Ab-oligo 偶联物合并,并与孔内的特定固定捕获寡核苷酸杂交,从而创建抗体阵列。


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-反应迅速、操作简单,30 分钟即可激活抗体和寡核苷酸,1 小时即可完成寡核苷酸偶联,无需具备专业科学知识,省时省力

-清洁程序稳定、灵活(适用于抗体片段和其他蛋白),抗体或者蛋白均可

-抗体和寡核苷酸回收率高,可帮您节省宝贵的试剂

-单向化学,消除了交联的风险

-共价键形成的偶联物高度稳定

-适用于含 10-120 个碱基对的单链寡核苷酸,含多达 80 个碱基对的双链寡核苷酸

-连接化学发生在 5' 端和 3' 端的末端,可以与其他修饰结合


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