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Emfret产品授权Emfret代理靶点科技现货表

更新时间:2024-03-23   点击次数:141次

emfret成立于2002emfret公司专注心血管和血液系统研究用抗体研发和生产,emfret公司的抗体不仅适用于

分析、WB检测,还可用于免疫组化/免疫荧光及免疫共沉淀检测。

产品列表

货号

产品名称

规格

M011-0

mouse GPVI

0.1mg

M011-1

mouse GPVI

1.5mL

M025-0

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

0.5mg

M025-1

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

M025-2

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

M025-3

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

M021-0

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

0.5mg

M021-1

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

M022-0

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

0.5mg

M023-2

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

M024-0

Integrin alphaIIb (GPIIb, CD41)

6mg

M030-0

Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61)

0.5mg

M031-0

Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61)

0.5mg

M031-1

Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61)

1.5mL

M040-0

GPIbalpha (CD42b)

0.5mg

M040-1

GPIbalpha (CD42b)

1.5mL

M040-2

GPIbalpha (CD42b)

1.5mL

M040-3

GPIbalpha (CD42b)

1.5mL

M041-0

GPIbalpha (CD42b)

0.5mg

M041-1

GPIbalpha (CD42b)

1.5mL

M042-0

GPIbalpha (CD42b)

0.5mg

M042-1

GPIbalpha (CD42b)

1.5mL

M043-0

GPIbalpha (CD42b)

0.5mg

M043-1

GPIbalpha (CD42b)

1.5mL

M050-0

GPIbbeta (CD42c)mouse and human

0.5mg

M050-1

GPIbbeta (CD42c)mouse and human

1.5mL

M051-0

GPIX (CD42a)

0.5mg

M051-1

GPIX (CD42a)

1.5mL

M060-1

GPV (CD42d)

1.5mL

M061-0

GPV (CD42d)

0.5mg

M061-1

GPV (CD42d)

1.5mL

M070-0

Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)

0.5mg

M070-1

Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)

1.5mL

M071-0

Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)

0.5mg

M071-1

Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa)

1.5mL

M080-0

Integrin alpha5 chain (CD49e)mouse and human

0.5mg

M080-1

Integrin alpha5 chain (CD49e)mouse and human

1.5mL

M110-0

CD9

0.5mg

M110-1

CD9

1.5mL

M120-0

CD31 (PECAM-1)

0.5mg

M130-0

CD62P (P-selectin)

0.5mg

M130-1

CD62P (P-selectin)

1.5mL

M130-2

CD62P (P-selectin)(靶点科技现货)

1.5mL

P150-1

von Willebrand Factor (vWF)

1.5mL

P140-1

fibrinogen

1.5mL

P180-1

negative control

1.0mL

P190-1

negative control

1.0mL

P190-2

negative control

1.0mL

P190-3

negative control

1.0mL

R300

Antibodies for Mouse Platelet Depletion(靶点科技常年现货)

0.5mg

C301

Antibodies for Mouse Platelet Depletion

0.5mg

D200

Two-Color Analysis of Mouse Platelet Activation(靶点科技现货)

2.0ml

X488

In Vivo Mouse Platelet Labeling

0.1mg

X649

In Vivo Mouse Platelet Labeling

0.1mg

抗体相关实验技术Protocols

小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析

缓冲液和试剂准备:

Tris缓冲盐水/肝素(TBS/Hep20mM Tris/HCl137mM NaClpH 7.3;含有20U/ml肝素

磷酸盐缓冲PBS):137mM NaCl2.7mM KCl1.5mM KH2PO48mM Na2HPO4pH 7.14

改良台氏液/改良Tyrode''s溶液:134mM NaCl0.34mM Na2HPO42.9mM KCl12mM NaHCO320mM HepespH 7.05mM葡萄糖;0.35%w/v)牛血清白蛋白

腺苷三磷酸双磷酶Apyrase溶于水(10 U/mL),-20°C下储存

前列环素ProstaglandinProstaglandin 2, PGI2):溶于水(1 mM-20°C下储存

CaCl21 M溶于水。

稀释或洗涤全血的制备

1用肝素化玻璃毛细管(如环帽)从眶后神经丛抽取50µL血液,放入1.5 ml含有200µLTris缓冲盐水/肝素20 U/ml)的试管中。

21 mL Tyrode缓冲液中稀释,用于流式细胞仪分析。

3为了制备洗涤过的血液,将稀释的血液以900 x g离心5分钟,去除上清液,并将沉淀重悬在1.25 mL Tyrode缓冲液中。

4在实验开始前直接加入1mM CaCl2

注:对于凝血酶诱导的血小板活化,必须去除血浆以防止抗凝血酶活性

血小板制备:

1、制备洗涤过的血小板是一种更耗时的方法,需要大量的血液,但产生的血小板制剂可以使用数小时。

2、用1.5 cm玻璃毛细管从眶后丛收集0.5-1 mL血液,放入含有200 µL TBS/肝素(20 U/ml)的1.5 mL管中。去除含有一些红细胞的上清。

3、以500 x g离心样品5分钟,并将富含血小板的血浆(PRP)转移到新的试管中。

4、将血小板悬浮液以300 x g离心8分钟,并将不含任何红细胞的PRP转移到新的试管中。

5、加入0.5 µM前列环素(PGI2),以1300 x g离心5分钟。

6、将血小板颗粒重新悬浮在1 mL Tyrode缓冲液中,加入0.02 U/mL腺苷三磷酸双磷酶0.5 µM前列环素,在37下孵育5分钟,并在1300 x g下离心5分钟。

7、重复步骤5,将血小板颗粒重悬于0.5 ml Tyrode缓冲液中,加入0.02 U/mL腺苷三磷酸双磷酶,并在37下孵育30分钟。

血小板表面糖蛋白的单色分析:

1、将5 µL特异性或阴性对照抗体和25 µL稀释的全血在分析管中混合,涡旋混匀1-2秒。

2、在室温下孵育15分钟。

3、加入400 µL PBS停止反应,并在30分钟内进行分析。


1.jpg


如所述,将样品与FITC缀合的对照IgG(黑线)、GPVI抗体GPV抗体孵育。血小板通过前向散射(FSC/侧散射(SSC)血小板通过前向(FSC/侧向(SSC)散射特征进行筛选。在单独的直方图中显示了被筛选(R1)的血小板的荧光(FL1)强度。RBC:红细胞。

血小板活化的双色分析:

1、将5 µL特异性或阴性对照抗体与5 µL泛血小板标记物一起加入测定管中。

2、此时,加入小体积(<5 µL)的任何额外的试剂(如抑制剂)。

3、加入26 µL稀释的全血或经洗涤过的血小板(100万),涡旋混匀1-2秒。

在室温下孵育15分钟。加入400 µL PBS停止反应,并在30分钟内进行分析。


2.jpg


小鼠血小板分别与PBS0.1U/mL的凝血酶(thrombin)一起与FITCPE结合的mAbs一起孵育。通过GPIXGPIIbIIIaFL1; gate 1)的表达对血小板进行了筛选。

二、免疫组织化学(用丙酮固定冷冻切片)

请注意:不建议在(对)甲醛固定的样本上进行免疫组织化学染色,因为大多数大鼠抗体在这些条件下对小鼠组织的效果很差。

1将冷冻组织的切片放在玻片上,并在4°C下的冰冷100%丙酮中固定20分钟。在室温下干燥一整夜。

2为了减少试剂的用量,在玻片上的组织切片周围可以用防水笔画一个疏水圈。在所有后续的步骤中,这个圈起来的区域都不应该干燥。因此,建议在潮湿的盒子中进行孵育步骤。

3PBS中孵育玻片20分钟。

4使用过氧化物酶结合的二抗时,将玻片在室温下与0.03%H2O2孵育10分钟以抑制内源过氧化物酶活性。在PBS中三次洗涤玻片,每次5分钟。

5、用PBS稀释比例1:101:100)的封闭液(抗体宿主物种的血清),室温下孵育玻片1小时。

6、一抗2-10 µg/ml)室温孵育2小时。

7吸取多余液体,然后在PBS中洗涤三次,每次5分钟。

8用荧光素或过氧化物酶结合的二抗(例如:亲和纯化的驴抗大鼠IgG-FITCHRP)覆盖玻片,按照说明书在封闭液中稀释,室温下孵育1小时。

9吸取多余液体,PBS洗涤三次,每次5分钟。

10荧光染色的样本可以直接通过荧光显微镜分析。

11为了可视化过氧化物酶标记的组织,用新鲜制备的3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)底物覆盖玻片,并在显微镜下可见红色染色,时间可在530分钟之间变化。在橙色背景染色出现之前,用去离子水冲洗停止反应。用伊红染色30-240秒,然后在温水中冲洗玻片20分钟。使用水溶性封装溶液固定切片。

三、免疫沉淀

缓冲液和试剂准备:

PBS/EDTA137mM NaCl2.7mM KCl1.5mM KH2PO48.0mM Na2HPO4 x 2H2OpH 7.35 mM EDTA

IP缓冲液:40 mM Tris/HCl0.3 M NaCl1 mM EDTA2 mM PMSF10µg/mL Leupeptin蛋白酶抑制剂、10µg/mL Aprotinin抑肽酶1µg/mL Pepstatin胃蛋白酶抑制剂。

Igepal非离子表面活性剂:10%H2O溶液。

2x SDS样品缓冲液:10%β-巯基乙醇(用于还原缓冲液)、10%Tris缓冲液(1.25 M)、20%甘油、4%SDS0.02%溴酚蓝

1将小鼠血小板或细胞在1 mL PBS/EDTA5分钟,1300 x g)中洗涤3,并使用IP缓冲液重悬。

21%Igepal 在室温下溶解血小板15–20分钟

310000 x g离心5分钟去除细胞碎片,并将上清液转移到新的试管中。

4加入20µL洗涤过的protein G agarosePGA)。在4°C混匀孵育至少3小时。

53000 x g离心样品5分钟。将上清液转移到新的试管,以说明书中给定的浓度(通常在2-5µg/mL之间)加入抗体,30分钟后加入25µL洗涤过的PGA。在4°C混匀孵育至少2小时,最好过夜。

6将样品在3000 x g下离心1分钟PGA中加入1 mL含有1%Igepal1 x IP缓冲液。在3000 x g下离心1分钟。

7、用IP缓冲液中洗涤PGA两次(3000 x g离心1分钟)。

8、加入25µL 1x SDS样品缓冲液(还原或非还原)PGA重悬,煮沸5分钟。9然后将样品冷冻(-20°C)以备日后使用,或者进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。

四、免疫印迹分析(Western Blot Analysis

缓冲液和试剂准备:

裂解缓冲液:40mM Tris/HCl0.3M NaCl1mM EDTA0.05%NaN31%Igepal

PBS137 mM NaCl2.7 mM KCl1.5 mM KH2PO48.0 mM Na2HPO4 x 2H2OpH 7.3

5%脱脂牛奶-PBS5%脱脂奶粉PBS

PBS/TPBS0.1%吐温20

1%脱脂牛奶-PBS/T1%脱脂牛奶的PBS/T

所有步骤都可在室温下进行:

1在裂解缓冲液中制备小鼠血小板或细胞的裂解物,并与(2xSDS样品缓冲液在95°C下孵育5分钟。

2、根据说明书,在还原或非还原条件下,通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质,并将蛋白质转移到PVDF膜上。

35%脱脂牛奶封闭膜1小时。

4、加入PBS/T-1%牛奶稀释的一抗2-5µg/mL),孵育1小时。

5PBS/T冲洗膜两次,30分钟。洗涤程序可以减少到三,每10分钟。

6加入PBS/T-1%牛奶稀释的二抗HRP偶联的抗大鼠Ig孵育45-60分钟。

7PBS/T冲洗膜两次,30分钟。

8、使ECL(化学发光)显色



Emfret热卖产品

货号

产品名称

规格

品牌

R300

Antibodies for Mouse Platelet Depletion现货

0.5 mg

emfret

M023-2

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)现货

1.5mL

emfret

X488

anti - GPIbbeta derivative Rat IgG DyLight 488 in vivo platelet labeling

100μg

emfret

C301

Sterile non-immune rat IgG现货

0.5 mg

emfret

M040-1

GPIbalpha (CD42b)现货

1.5 mL

emfret

D200

JON/A Rat IgG2b PE flow cytometry 1 mL

200 tests

emfret

X649

In Vivo Mouse Platelet LabelingCloneanti - GPIbbeta derivative IsotypeRat IgG 标记:DyLight 649 Appli现货

0.1mg

emfret

M040-2

Xia.G5 Rat IgG2b PE FC现货

1.5 mL

emfret

M011-1

JAQ1/ Rat (Wistar) IgG2a FITC FC现货

1.5 mL

emfret

M130-1

CD62P (P-selectin)

1.5 mL

emfret

M040-3

GPIbalpha (CD42b)现货

1.5 mL

emfret

M043-0

GPIbalpha (CD42b) Xia.B2 Rat IgG2a purif. 现货

0.5 mg

emfret

M050-1

GPIbbeta (CD42c)Xia.C3 Rat IgG2a FITC现货

1.5 mL

emfret

M025-1

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61) Leo.F2 Rat IgG2aFITC

1.5mL

emfret

M042-0

Xia G7 Rat IgG1 purif现货

0.5 mg

emfret

M051-1

GPIX (CD42a) Xia.B4 Rat IgG1

1.5 mL

emfret

M011-0

GPVI JAQ1 Rat IgG2a purif现货

0.1 mg

emfret

M021-1

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61) Leo.H4 Rat IgG2b

1.5 mL

emfret

M130-2

CD62P (P-selectin) Wug.E9 Rat IgG

1.5 mL

emfret

M050-0

GPIbbeta (CD42c) mouse and humanCloneXia.C3 IsotypeRat IgG2a 标记:purif.

0.5mg

emfret

M043-1

GPIbalpha (CD42b) Xia.B2 Rat IgG2a现货

1.5 mL

emfret

M070-1

Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa) Sam.G4 FITC

1.5mL

emfret

M071-1

Integrin alpha2 chain (CD49b, GPIa) Sam.C1 FITC

1.5mL

emfret

M120-0

CD31 (PECAM-1) Pec.H3 purif.

0.5mg

emfret

M051-0

Purified Rat Anti-Mouse GPIX (CD42a)

0.5 mg/mL

emfret

P140-1

fibrinogen polyclonal Rabbit IgGFITC FC

1.5 mL

emfret

P150-1

von Willebrand Factor (vWF)

1.5mL

emfret

P190-2

negative control polyclonal Rat IgGPE FC

1.0 mL

emfret

M030-0

Integrin beta3 chain (GPIIIa, CD61) Luc.A5 Rat IgG2apurif.

0.5 mg

emfret

M025-2

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

emfret

M025-3

Integrin alphaIIbbeta3 (GPIIb/IIIa, CD41/CD61)

1.5mL

emfret




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