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大肠杆菌诱导表达蛋白的原理和自诱导的新产品

更新时间:2024-06-05   点击次数:96次

诱导表达原理:

将外源基因克隆在含有Lac启动子的表达载体中,让其在大肠杆菌中表达。先让宿主菌生长,LacI产生的阻遏蛋白与Lac操纵基因结合,从而不能进行外源基因的转录和表达,此时宿主菌正常生长。然后向培养基中加入Lac操纵子的诱导物IPTG,阻遏蛋白不能与操纵基因结合,则外源基因大量转录并高效表达。


大肠杆菌诱导表达蛋白的原理和自诱导的新产品

①Z、Y、A是指结构基因,用于表达性状;

lacZ编码β-半乳糖苷酶,它可以切断乳糖的半乳糖苷键,而产生半乳糖和葡萄糖;

lacY编码β-半乳糖苷透性酶,它构成转运系统,将半乳糖苷运入到细胞中;

lacA编码β-半乳糖苷乙酰转移酶,只将乙酰-辅酶A上的乙酰基转移到β-半乳糖苷上;

②I是指调节基因,调节分泌阻遏物或诱导物;

③O是指操纵基因,与阻遏蛋白的结合部位;

④P是指启动子,启动基因的转录和翻译。

乳糖操纵子是参与乳糖分解的一个基因群,由乳糖系统的阻遏物和操纵序列组成,使得一组与乳糖代谢相关的基因受到同步的调控。1961年雅各布(F.Jacob)和莫诺德(J.Monod)根据对该系统的研究而提出了著名的操纵子学说。在大肠杆菌的乳糖系统操纵子中,β-半乳糖苷酶,半乳糖苷渗透酶,半乳糖苷转酰酶的结构基因以LacZ(z), Lac Y(y),Lac A(a)的顺序分别排列在质粒上,在z的上游有操纵序列Lac O(o),更前面有启动子Lac P(p),这就是操纵子(乳糖操纵子)的结构模式。编码乳糖操纵系统中阻遏物的调节基因Lac I(i)位于和p上游的邻近位置。

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当使用自诱导培养基时,传统这种使用IPTG,检测OD600的过程都可以省略。靶点科技现货自诱导培养基,此外,产量更高。但是对于包涵体的问题,需要优化。

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