在人类心脏急性心肌梗死后，数百万个心肌细胞丢失并被纤维化疤痕所取代。虽然这种纤维化疤痕对于维持心脏的结构完整性是必要的，但它的存在与收缩质量的减少相结合，最终会导致心力衰竭。仍然迫切需要开发治疗策略来替代丢失的心脏组织。非哺乳动物脊椎动物生物，如硬骨斑马鱼，具有在多种类型损伤后再生丢失的心肌细胞的能力。值得注意的是，斑马鱼可以在冷冻损伤后再生心脏，冷冻损伤是一种损伤模型，其中放置在心脏上的液氮冷却探针会导致细胞死亡、炎症反应的激活和含有纤维化胶原蛋白的疤痕沉积，类似于人类心脏中的心肌梗塞。虽然过去二十年的研究工作使我们对心脏再生机制的了解大大增加，但目前尚不清楚伤口边界的再生心肌细胞如何侵入并最终取代受伤后含有胶原蛋白的疤痕组织。
通过对斑马鱼心脏再生过程中心肌细胞突出到受伤组织中的深入分析。我们表明，伤口边界的心肌细胞表现出迁移细胞的特征，包括运动丝状伪足样延伸到受伤组织中，以及调节肌动蛋白动力学、粘着斑和 ECM 重塑的基因表达程序的上调。此外，我们表明巨噬细胞在边界区起着重塑 ECM 和促进心肌细胞突出的重要作用。然后我们表明 Mmp14b 是巨噬细胞存在和边界区 ECM 重塑的重要调节因子，随后心肌细胞在斑马鱼心脏再生过程中侵入受伤组织。
论文信息：
论文题目：Border-zone cardiomyocytes and macrophages regulate extracellular matrix remodeling to promote cardiomyocyte protrusion during cardiac regeneration
期刊名称：Nature Communications
时间期卷：16, Article number: 3823 (2025)
在线时间：2025年4月23日
DOI：doi.org/10.1038/s41467-025-59169-4
产品信息：
货号：CP-005-005
规格：5ml+5ml
品牌：Liposoma
产地：荷兰
名称：Clodronate Liposomes and Control Liposomes
办事处：Target Technology（靶点科技）
氯膦酸盐脂质体斑马鱼巨噬细胞。斑马鱼心脏冷冻损伤后，多种细胞类型协调对损伤的反应。例如，内皮细胞、心内膜细胞和心外膜细胞已被证明可提供生长因子和信号分子，以促进受伤组织的血运重建和心肌细胞再生。成纤维细胞主要起源于心外膜，已被证明在心脏再生过程中沉积 ECM 以支持心脏，并且对损伤后心肌细胞增殖至关重要。近年来，免疫细胞在促进心脏再生过程中的重要性也得到了认可。特别是，巨噬细胞已被证明在斑马鱼、蝾螈和新生小鼠心脏的损伤再生中起着重要作用。巨噬细胞已被证明直接促进和调节冷冻损伤心脏中瘢痕/ECM 的组成。此外，氯膦酸盐脂质体给药（荷兰Liposoma，清除巨噬细胞）或使用遗传模型消耗巨噬细胞会导致 CM 增殖和再生心脏新生血管形成缺陷。虽然很明显，许多（如果不是全部）心肌细胞类型在心脏再生过程中起着至关重要的作用，但它们对冷冻损伤后心肌细胞纤维化组织重新填充的贡献在很大程度上是未知的。氯膦酸盐二钠脂质体清除巨噬细胞在斑马鱼心脏冻伤模型巨噬细胞功能研究，荷兰Liposoma巨噬细胞清除剂Clodronate Liposomes见刊于Nature Communications：斑马鱼交界区心肌细胞和巨噬细胞调节细胞外基质重塑，促进心脏再生过程中心肌细胞突出。
氯膦酸盐脂质体巨噬细胞促进斑马鱼心肌冻伤修复模型中巨噬细胞清除解决方案：
注射方式：腹腔注射
注射剂量：10ul
注射时间点：根据实验目的，建模前或者建模后
实验数据：
巨噬细胞清除方案
Tg（mpeg：NTR-YFP） 成年鱼的脑室受到冷冻损伤。然后将冷冻损伤的鱼在冷冻损伤后 4 至 6 天（每天补充）在 5 μm 尼呋匹林醇或 DMSO 对照水浴中孵育。以 7 dpci 提取心脏，并用 GFP 抗体进行免疫染色，以检查巨噬细胞清除效率和鬼笔环肽染色，以量化如上所述边界区的 CM 突起。
为了清除驻留的巨噬细胞，在冷冻损伤前 8 天用 10 μl 氯膦酸盐脂质体 （5 mg/ml） （Liposoma， Amsterdam， The Netherlands） 或 PBS 对 Tg （mpeg1：EGFP） 成年鱼进行 IP 注射。如上所述，以 7 或 10 dpci 提取心脏，然后进行冷冻切片、CHP 染色和鬼笔环肽染色。如上所述，对边界区的 CHP 强度和 CM 突起进行定量。
为了在以后的时间点清除巨噬细胞，在 10 dpci 收集心脏之前，以 3、6 和 9 dpci ip（mpeg1：EGFP）注射 10 μl 氯膦酸盐脂质体 （5 mg/ml）（Liposoma，阿姆斯特丹，荷兰）或 PBS 对照脂质体。研究巨噬细胞清除对 CMs 中 mmp14b 过表达的影响，Tg（hsp70l：loxP-EGFP-loxP-mmp14b-P2A-tagBFP）;在冷冻损伤前 1 天和之后每 4 天向成年鱼注射氯膦酸盐脂质体或 PBS 脂质体 Tg（−5.1myl7：CreERT2）。如上所述，进行他莫昔芬/乙醇注射和热休克以诱导 mmp14b 过表达。以 10 或 21 dpci 提取心脏，然后按上述方式进行冷冻切片和鬼笔环肽或 MHC 染色。如上所述，对边界区的 CM 突出和 CM 皮质覆盖进行量化。
