Lumafluor公司的RetroBeads™是用于逆行示踪的荧光微球，并且是被大量文献证明有效的微球。数百篇已发表的论文证明Lumafluor的Retrobeads™逆行示踪荧光微球在无脊椎动物到灵长类动物以及所有介于两者之间的系统中是有效的。
Lumafluor Retrobeads™产品特点：
1)高度受限的注射-非常适合进行详细的连通性研究。
2)在活细胞中无限期（> 1年！），无毒。
3)与大多数其他顺行示踪剂，原位杂交和免疫组织化学兼容。
产品订购：
| 品牌 | 产品名称 | 规格 |
| Lumafluor | Red Retrobeads, | 100ul |
| Lumafluor | Red IX Retrobeads, | 100ul |
| Lumafluor | Green IX Retrobeads, | 100ul |
Lumafuor荧光微球逆行示踪剂中文使用说明
产品形态： 随附的小瓶包含悬浮在蒸馏水中的浓缩珠溶液。如果红珠用于逆行追踪神经元通路，则溶液可以按原样使用或稀释使用。在大鼠视觉皮层中，使用红珠时，1:4 的稀释度似乎不会降低逆行标记的质量或程度。但是，对于初始实验，我们强烈建议使用溶液全强度。除蒸馏水外，标准盐溶液（NaCl、KCl）也可用作稀释剂。所提供的绿色微球，可以直接用于逆行追踪实验。不建议稀释绿色微球。
产品储存：珠溶液应储存在加湿容器中，在冰箱中，以防止蒸发。不要冻结！被冻结的珠子将无法工作，也无法挽救。如果珠子变干，它们就不能被重组。这种材料的保质期尚未确定，但如果储存得当，它可以保持几年的良好状态。
产品应用：最好使用压力注射珠子（例如 1 毫升 Hamilton 注射器或加压空气注射系统）。对于局部电路工作，已通过具有 30-50 um 直径的玻璃移液器注入非常少量 (30-50 nl)。对于常规逆行追踪，使用更大体积 (0.1-0.3 ul) 和更大直径的移液器吸头。然而，即使注射量很大，珠子也不会扩散到远离注射部位的地方（通常小于 1 毫米）。因此，为了标记投射到大型结构的所有或大部分神经元，应该进行几次注射。不建议将珠子的离子电渗应用作为传递示踪剂的有效方法。然而，珠子确实带有净负电荷。
生存时间：在大多数温血脊椎动物系统中，注射后的最短有效生存时间约为 24 小时。标记强度随着存活时间的延长而增加，最长可达 48 小时。48 小时后，未观察到标记强度增加（或减少）。这些值在冷血动物中可能有很大不同，建议初始生存时间为一周。最长存活时间尚未确定，但即使在 14 个月的存活时间后，标签的质量或范围也没有变化。单元格可能被标记。未观察到对动物或神经元的毒性作用。
固定和处理：标准固定是用 0.1 M 磷酸盐缓冲液洗涤，然后在 0.1 M 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4) 中加入 4% 多聚甲醛。戊二醛会产生大量的组织自发荧光，这可能会掩盖珠标记的神经元，应尽可能避免。绿色珠子在戊二醛固定材料中将看不见。将冷冻切片收集在磷酸盐缓冲液中，安装在涂有明胶的载玻片上，然后风干。干燥后，可以将载玻片在二甲苯中清洗 1 分钟，然后用 Fluoromount 或 Krystalon 盖上盖子。Fluoromount 购自 Atomergic Chemetals Corp., Farmingdale, NY；来自新泽西州吉布斯敦的 Harleco (EM Industries) 的 Krystalon。
短暂接触酒精和二甲苯无害，但长时间接触（超过 5 分钟）会破坏珠子。珠子对甘油非常敏感，如果安装在含甘油的溶液中会迅速褪色。在需要使用非透明/固定剂的情况下，水杨酸甲酯优于甘油。如果将载玻片保存在黑暗中，细胞中的标记至少一年不会褪色（尽管背景自发荧光可能会显着增加）。到目前为止，在塑料嵌入后保留珠子标记的尝试尚未成功。
观察：红色珠子中的染料是罗丹明，因此可以使用任何用于罗丹明的荧光滤光片。一些较旧的尼康罗丹明滤镜组会产生非常高的背景，这会使标记的细胞不可见。使用 Zeiss 和 Leitz 标准罗丹明滤光片都获得了良好的结果。对于绿色珠子，宽带荧光素过滤器效果很好。路西法黄的滤光片组提供更强烈的信号，但以更高的背景为代价。窄带荧光素滤光片会产生比宽带滤光片弱得多的信号。 即使经过长时间的观察或显微摄影，珠子也不会明显褪色。
使用低功率、低数值孔径的干式物镜（例如 X4、X10）通常看不到标记。如果细胞被强烈标记，X10 浸没物镜（数值孔径为 0.4 或更大）或更高功率的干物镜通常会显示细胞。然而，X25 浸没物镜通常会显示非常清晰标记的细胞，而低功率物镜会错过这些细胞。这些警告尤其适用于绿珠。在决定实验不起作用之前，请使用浸入物镜检查注射部位附近的部分。应该存在许多局部标记的细胞。
绿珠使用者的附加信息：在迄今为止所做的工作中，似乎年轻的动物比年长的动物更好地传递标签。此外，年轻动物的组织自发荧光较低。因此，如果可能的话，建议在涉及绿珠的实验中使用年轻的动物。因为绿色珠子在比红色珠子更短的波长下被激发，所以组织自发荧光是一个更大的问题。因此，尽量减少自发荧光将产生更好的对比度信号。减少自发荧光的方法包括：
1) 使用更薄的切片（例如 30 um 而不是 40 或 50）
2) 使用较年轻的动物
3) 在盖玻片后立即检查切片（背景随着时间的推移而增加）
