巨噬细胞清除剂（如氯膦酸二钠脂质体，Clodronate Liposomes，货号CP-005-005，荷兰Liposoma）用于清除体内特定组织的巨噬细胞后，通过回输（Adoptive Transfer）修饰或来源特定的巨噬细胞，是研究巨噬细胞功能的经典实验策略。其核心在于精确控制清除与回输的时间窗口，确保原位巨噬细胞被有效清除，而回输的细胞能存活并发挥功能。
清除剂选择与给药
•腹腔注射：常用于清除腹腔巨噬细胞，典型剂量为200 µL。
•气管内给药 (i.t.)：用于清除肺泡巨噬细胞，例如在哮喘模型中，常用40 µL/次，连续给药2天。
•尾静脉注射：常用于清除肝脏等全身性巨噬细胞，或用于回输细胞。
•常用试剂：荷兰Liposoma公司生产的氯膦酸二钠脂质体（货号CP-005-005）是广泛使用的成熟试剂，通过巨噬细胞的内吞作用诱导其凋亡12。
•给药方式：根据目标组织选择不同的给药途径：
回输时间点
回输时间点是实验成功的关键，需在清除剂效果达到峰值且其药效基本消退后进行，以避免回输细胞被二次清除。
•腹腔清除后：通常在清除剂注射后72小时回输细胞。
•肺泡清除后：在末次清除剂给药后24小时回输细胞。
•肝脏清除后：清除后约48小时进行回输。
回输细胞质控
•细胞类型：可以是骨髓来源的巨噬细胞（BMDMs）、腹腔巨噬细胞（pMacs）或从特定基因敲除小鼠（如CD1d-KO）中分离的细胞。
•回输数量：根据实验模型和给药途径调整，例如腹腔回输常用3×10⁶个细胞，肺泡回输常用5×10⁵个细胞2。
•回输方式：通常与清除途径一致，如腹腔注射、气管内注射或尾静脉注射。
核心应用与发现
此技术被广泛应用于探究巨噬细胞在疾病中的作用。例如，有研究利用该技术发现，缺乏CD1d分子的巨噬细胞会因脂质代谢重编程而对炎症刺激反应更强，揭示了CD1d在调控巨噬细胞代谢与免疫反应中的关键作用。
总结：巨噬细胞清除与回输是一个精密的两步实验流程。成功的关键在于根据目标组织选择合适的清除剂给药方式，并严格遵循经文献验证的、针对该组织的理想回输时间窗口（通常为清除后24-72小时），同时确保回输细胞的数量、活力和纯度。
骨髓嵌合小鼠巨噬细胞回输模型，可以参考如下nature communications文献。
用于骨髓嵌合实验的10–12周龄雌性C57BL/6J小鼠接受9.5 Gy的照射。次日，从供体小鼠体内在无菌条件下分离骨髓并通过静脉注射给予受体小鼠。在照射后第10天，使用氯膦酸脂质体处理小鼠以清除组织驻留的巨噬细胞。经过50天的骨髓重建后，小鼠即可用于实验。
论文信息：
论文题目：Acid ceramidase of macrophages traps herpes simplex virus in multivesicular bodies and protects from severe disease
期刊名称：Nature Communications
时间期卷：11, Article number: 1338(2020)
在线时间：2020年3月12日
DOI： doi.org/10.1038/s41467-020-15072-8
产品信息：
货号：CP-005-005
规格：5ml+5ml
品牌：Liposoma
产地：荷兰
名称：Clodronate Liposomes& Control Liposomes
办事处：Target Technology(靶点科技)
Clodronate Liposomes氯膦酸盐脂质体清除病毒模型中巨噬细胞 ，荷兰Liposoma巨噬细胞清除剂ClodronateLiposomes见刊于Nature Communications：巨噬细胞的酸性神经酰胺酶将单纯疱疹病毒困在多囊泡体中，并防止严重疾病。
Liposoma巨噬细胞清除剂Clodronate Liposomes氯膦酸二钠脂质体清除肿瘤相关巨噬细胞的材料和方法：
D-erythro-sphingosine (C18, 860490) and D-Galactosyl-β1-1’-N-Nervonoyl-D-erythro-sphingosine (C24:1, β-D-Galactosyl Ceramide, 110759), were obtained from Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL, USA). Glycoceramidase (E9030-100MUN), sphingomyelinase (S8633-25UN), Cy3-linked DBCO (777366-1 mg) and DAPI (D9542) were purchased from Millipore Sigma (Darmstadt, Germany). Recombinant mouse Asah2 (3558-AH) was purchased from R&D Systems (Minneapolis, MN, USA). The sphingosine kinase inhibitor SKI-II (CAS # 312636-16-1; Cat # 2097) was obtained from Tocris Bioscience (Bristol, United Kingdom) and tamoxifen (CAS # 10540-29-1, Cat # T5648-5G) and cornoil (CAS # 8001-30-7, Cat # C8267-500ML) from Millipore Sigma. Clodronate and control liposomes were purchased from Liposoma (CP-005-005, Amsterdam, Netherlands). Clickable ω-azido-sphingosine ((2S,3R,E)-2-amino-18-azidooctadec-4-ene-1,3-diol) for click chemistry42 staining was synthesized in-house by Julian Fink.
Depletion of macrophages
For macrophage-depleted mouse experiments, mice were treated intravenously with 50 mg/kg clodronate to deplete tissue resident macrophages. After 3 days, mice were ready to be used in experiments.
材料和方法文献截图：
