肿瘤遗传学领域的研究进展，助力人们发现了各类肿瘤赖以生存的关键成瘾基因，也推动肿瘤治疗从传统化疗迈入分子靶向药物时代。其中，肿瘤特异性单克隆抗体的研发及其在多种恶性肿瘤中的广泛应用是核心突破。1997 年，美国食品药品监督管理局（FDA）批准抗 CD20 单克隆抗体利妥昔单抗用于治疗非霍奇金淋巴瘤（NHL），标志着人类肿瘤靶向治疗时代正式开启。将利妥昔单抗纳入经典 CHOP 化疗方案（环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、泼尼松）后，非霍奇金淋巴瘤患者总体死亡率显著下降，远期预后得到改善。除利妥昔单抗外，靶向人表皮生长因子受体 2（HER2）的曲妥珠单抗革新了 HER2 蛋白阳性乳腺癌亚型的治疗方案。同理，西妥昔单抗已广泛用于表皮生长因子受体（EGFR）阳性结直肠癌及头颈部鳞状细胞癌（SCCHN）的临床治疗。
抗肿瘤抗体通过结合肿瘤细胞表面抗原发挥双重作用。第一，抗体可作为细胞信号通路激动剂或拮抗剂介导肿瘤杀伤：一方面阻断肿瘤细胞自身增殖、存活信号，或诱导细胞死亡信号。例如曲妥珠单抗抑制 HER2 受体信号、西妥昔单抗阻断 EGFR 信号通路，均属于该作用机制。另一方面，抗体可靶向肿瘤微环境（TME）中的肿瘤浸润免疫细胞、基质细胞与血管内皮细胞：通过阻断免疫抑制信号或免疫检查点激活抗肿瘤免疫应答，也可抑制血管生成、破坏利于肿瘤生长的微环境。典型代表包括：阻断细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4（CTLA-4）与程序性死亡受体 1（PD-1）的 T 细胞检查点抑制剂伊匹木单抗、帕博利珠单抗；以及靶向血管内皮生长因子受体（VEGFR）的贝伐珠单抗。第二，除抗原识别功能外，抗体 Fc 段可激活补体系统，诱发补体依赖的细胞毒作用；亦可结合自然杀伤细胞（NK 细胞）、巨噬细胞表面 Fc 受体，诱导抗体依赖的细胞毒作用（ADCC）或抗体依赖的细胞吞噬作用（ADCP）。尽管上述机制已被证实，但各类抗肿瘤抗体的临床疗效中，免疫效应的实际贡献占比尚不明确。不过，依托肿瘤组织抗原特异性表达的特点，激活机体免疫通路可在不损伤正常组织的前提下提升抗体抗肿瘤活性，是潜力的研发方向。
肿瘤微环境各类免疫细胞中，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）是几乎所有恶性肿瘤内数量显著的免疫细胞。巨噬细胞介导的抗体依赖细胞吞噬作用（ADCP）已被证实具备临床治疗价值，也是多数治疗性抗体发挥抑瘤效果的核心机制。抗体 Fc 段结合巨噬细胞表面 Fcγ 受体（FcγRs）后，会激活受体胞内免疫受体酪氨酸激活基序（ITAM）发生磷酸化，经鸟苷酸交换因子（Rac-GEFs）启动下游信号，最终触发吞噬作用。FcγRIIB 是携带免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIM）的 Fcγ 受体，该受体磷酸化后会启动负向信号级联反应，抑制细胞吞噬功能。多项临床前模型研究证实：在乳腺癌、淋巴瘤模型中，曲妥珠单抗、利妥昔单抗的强效抑瘤作用依赖 Fcγ 受体激活；而 FcγRIIB 基因敲除小鼠体内，两类抗体的抗肿瘤效果进一步增强。抗 CD38 治疗性抗体达雷妥尤单抗在淋巴瘤、多发性骨髓瘤中的抗肿瘤效应，同样以 ADCP 为核心驱动机制；此外，靶向 CD20 的人源单克隆抗体对慢性淋巴细胞白血病的细胞毒性也依赖 ADCP 通路。由此可见，调控巨噬细胞介导的 ADCP 通路，有望成为新一代高效肿瘤免疫治疗策略，具备巨大应用前景。
临床样本观察发现，非霍奇金淋巴瘤患者活检组织中，利妥昔单抗疗效与肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）丰度呈正相关，证实 TAMs 是介导单克隆抗体药效的关键介质。但在肿瘤晚期形成的大块病灶区域，抗体疗效通常大幅受限，提示肿瘤进展过程中 TAMs 的吞噬功能会发生缺陷。同时，诱导有效 ADCP 效应需要局部达到一定抗体浓度阈值，而现有绝大多数给药方式均难以满足该条件。因此，若要充分发挥治疗性抗体的药效，需联合其他药物修复或增强巨噬细胞吞噬能力、降低 ADCP 激活所需的浓度阈值。近期研究发现，高剂量烷化剂环磷酰胺联合抗 CD52 淋巴瘤单抗阿仑单抗，可通过激活 TAMs 的吞噬功能清除淋巴瘤细胞 。另有研究证实，Toll 样受体 9（TLR9）激动剂 CpG 寡脱氧核苷酸可重编程 TAMs 代谢通路，抵消抗吞噬信号，使其能够吞噬胰腺导管腺癌细胞 。上述结果表明，能够提升巨噬细胞吞噬能力的药物可解除 TAMs 吞噬肿瘤细胞的多重障碍，适合与单克隆治疗抗体联合用药。
本研究证实，巨噬细胞吞噬作用是利妥昔单抗、曲妥珠单抗、西妥昔单抗等多种单克隆抗体发挥抗肿瘤活性的核心介质。本研究搭建了一套全新、基于长期吞噬功能检测的高通量筛选（HTS）平台，经筛选与体内外验证，确定紫杉醇可广谱提升各类抗肿瘤单克隆抗体的疗效；其作用机制以激活巨噬细胞吞噬功能为主，无直接细胞毒性。机制层面，紫杉醇可上调巨噬细胞内 Fcγ 受体依赖的吞噬信号通路；同时重塑巨噬细胞膜表面蛋白表达谱，显著下调集落刺激因子 1 受体（CSF1R）。本研究数据证实，巨噬细胞膜表面 CSF1R 表达降低可增强其对肿瘤细胞的 ADCP 效应，揭示 CSF1R 在调控巨噬细胞吞噬功能中的全新作用。
清除方案：
RAG2−/−γc−/−小鼠体内 SW480 细胞成瘤生长情况。小鼠腹腔注射（ip）SW480 细胞，分别给予溶媒对照（Ctrl）或西妥昔单抗处理；同时给小鼠输注对照脂质体或氯膦酸脂质体，采用生物发光成像监测肿瘤生长。
清除效果：
A. Representative animal images of the macrophage depletion experiment with intraperitoneal engraftment of SW480 cells and cetuximab treatment. B-C. Representative FACS staining images showing the peritoneal macrophage depletion by clodronate liposome. D. Quantitative analysis of the peritoneal macrophage depletion by clodronate liposome; n=4.
论文信息：
论文题目：Promoting antibody-dependent cellular phagocytosis for effective macrophage-based cancer immunotherapy
期刊名称：Science Advances
时间期卷：Vol 8, Issue11(2022)
在线时间：2022年3月18日
DOI: 10.1126/sciadv.abl9171
产品信息：
货号：CP-005-005
规格：5ml+5ml
品牌：Liposoma
产地：荷兰
名称：Clodronate Liposomes&Control Liposomes
办事处：靶点科技
Clodronate Liposomes氯膦酸盐脂质体先眼眶后静脉注射，然后腹腔注射维持清除肿瘤模型里巨噬细胞。荷兰Liposoma巨噬细胞清除剂ClodronateLiposomes见刊于Science Advances：促进抗体依赖性细胞吞噬作用，构建高效巨噬细胞肿瘤免疫治疗方案。
Liposoma巨噬细胞清除剂Clodronate Liposomes氯膦酸二钠脂质体清除巨噬细胞的材料和方法：
In vivo macrophage depletion
Clodronate liposomes and control liposomes (PBS) were purchased from Liposoma (The Netherlands). Macrophages were depleted in mice with the following treatment schedule: 200 μl of either clodronate or liposomal control was injected intravenously via the retro-orbital sinus 24 hours before treatment of the mice with intraperitoneal injection with SW480 (2 × 105) and/or cetuximab antibody. Three days after tumor injection, 100 μl of either clodronate or liposomal control was injected (intraperitoneally) to maintain the depletion of macrophages. Bioluminescence images were captured with Lago X (Spectral Instruments Imaging), and signals were analyzed with the Aura Image software. Mice were then sacrificed on day 7, and peritoneal fluid was collected for macrophage analysis by flow cytometry.
氯膦酸二钠脂质体及对照脂质体（磷酸盐缓冲液型）购自荷兰 Liposoma 公司。
采用如下给药方案对小鼠进行巨噬细胞清除处理：给小鼠腹腔接种 SW480 细胞（2×10⁵个）、或联合西妥昔单抗抗体腹腔注射前 24 h，经眶后静脉丛静脉注射 200 μL 氯膦酸二钠脂质体或空白对照脂质体。肿瘤细胞注射 3 天后，腹腔注射 100 μL 氯膦酸二钠脂质体或对照脂质体，持续维持巨噬细胞清除效果。
采用 Lago X 活体成像系统（Spectral Instruments Imaging 公司）采集生物发光图像，使用 Aura Image 软件分析成像信号。第 7 天处死小鼠，收集腹腔灌洗液，通过流式细胞术检测巨噬细胞相关指标。
巨噬细胞清除材料和方法文献截图：促进抗体依赖性细胞吞噬作用，构建高效巨噬细胞肿瘤免疫治疗方案
