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巨噬细胞细胞清除剂Clodronateliposomes清除小鼠卵巢癌模型的巨噬细胞方案

更新时间:2026-07-29   点击次数:80次

ES2 是一种常用的人卵巢透明细胞癌细胞系。体内成瘤性:该细胞具有致瘤性。根据ATCC的数据,将1×10⁷个ES2细胞皮下接种到裸鼠体内,21天内100% (5/5) 的受试小鼠会形成肿瘤。


腹腔播散型卵巢癌造模

取 5×10⁶株表达 KTR 探针的 ES2 或 PtD 细胞重悬于 200 μL 磷酸盐缓冲液(PBS),接种至 6~10 周龄雌性裸鼠(nu/nu,MGH Cox 7 品系)腹腔,构建腹腔播散卵巢癌模型。

活体成像实验:造模后肿瘤自然生长约 2 周再给药干预;

药效生存期实验:造模后肿瘤生长约 1 周启动给药。


皮下荷瘤模型

CT26 结直肠癌细胞(1×10⁶个)接种于 6~10 周龄雌性 BALB/c 小鼠(JAX)胁部;YUMMER1.7 黑色素瘤细胞接种于同龄雌性 nu/nu 裸鼠胁部。待肿瘤可明显触及后开始给药;CT26 模型入组时肿瘤平均直径 7 mm±0.5 mm。

小鼠采用随机法分入各给药组,分组时各组小鼠体重无显著差异。


给药方案

1.曲美替尼、达拉非尼、马拉维若口服灌胃

曲美替尼:0.3 mg/kg;溶媒配方:1% 二甲基亚砜(DMSO)+0.5% 甲基纤维素 + 0.2% 吐温 80 水溶液;

达拉非尼:30 mg/kg,溶媒同曲美替尼;

马拉维若:30 mg/kg;溶媒配方:5% DMSO+0.5% 0.1 mol/L 稀盐酸水溶液;

以上药物均购自 Selleck Chem,采用灌胃给药。

2.氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞,巨噬细胞细胞清除剂Clodronateliposomes清除小鼠卵巢癌模型的巨噬细胞方案

氯膦酸盐脂质体(载药浓度 5 mg/mL)或空白 PBS 脂质体(Liposoma BV 公司产品),实验第 1 天腹腔注射 150 μL,此后每 3 天补充注射 50 μL,直至动物达到实验终点。

3.CSF1R 中和抗体耗竭巨噬细胞

抗小鼠 CSF1R 单克隆抗体(InVivoMAb,克隆号 AFS98,BioXCell)及大鼠 IgG2a 同型对照抗体(克隆 2A3,BioXCell),每只 200 μg 溶于 200 μL PBS;实验第 1 天起腹腔注射,每 2~3 天给药一次直至实验终点。

4.福替尼纳米粒(NanoFore)给药

临用前用 1×PBS 稀释:尾静脉给药终体积 50 μL,腹腔给药终体积 200 μL。

腹腔 ES2 卵巢癌模型药效实验中,纳米制剂等效福替尼剂量为 10 mg/kg;其余所有动物实验福替尼等效剂量均为 30 mg/kg。


肿瘤监测与终点判定

皮下肿瘤每日使用游标卡尺测量。

所有实验每日观察小鼠状态,出现以下任一情况即达到实验终点,并统计生存期:

① 体态评分≤2 分;

② 腹水或巨大肿瘤导致活动受限、出现疼痛 / 应激表现;

③ 肿瘤直径超过 1 cm。

腹腔内肿瘤负荷采用 Ami HT 活体荧光成像系统(Spectral Instruments Imaging)进行长时程活体荧光追踪;配套 Aura 成像软件定量分析每只小鼠同等大小感兴趣区内 ES2 细胞 ERK-KTR 探针总荧光光子通量(光子 / 秒),激发波长 / 发射波长:465 nm/510 nm。


巨噬细胞细胞清除剂Clodronateliposomes清除小鼠卵巢癌模型的巨噬细胞方案

共聚焦显微镜检测并定量分析经氯膦酸盐脂质体(clod-lip)处理的裸鼠,实验终点处剖取腹腔ES2肿瘤内的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)数量(每组肿瘤样本数 n≥5,比例尺:50 微米)。
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