LysM-Cre;LSL-DTR;CCSP-rtTA;TetO-EGFRL858R 是一个四重转基因小鼠模型，其核心用途是在诱导型EGFR突变肺癌模型中，实现对巨噬细胞的特异性、可诱导清除，从而研究巨噬细胞在肿瘤发生发展中的功能。
模型构成与工作原理：LysM-Cre;LSL-DTR;CCSP-rtTA;TetO-EGFRL858R 小鼠模型原理
该模型的四个遗传元件协同工作，分为肿瘤诱导和巨噬细胞清除两个独立且可控的系统：
1. 肿瘤诱导系统：CCSP-rtTA + TetO-EGFRL858R
CCSP-rtTA：由大鼠Clara细胞分泌蛋白（CCSP，又称Scgb1a1）启动子驱动表达反式激活因子（rtTA）。该启动子主要靶向肺部的II型肺泡上皮细胞（AT2）和Clara细胞。
TetO-EGFRL858R：携带人源EGFR L858R突变cDNA，其表达受四环素响应元件（TRE） 调控。
工作原理：当给予小鼠多西环素（DOX） 后，rtTA蛋白与DOX结合，激活TRE，从而在肺上皮细胞中特异性表达EGFR L858R突变蛋白，驱动肺腺癌（LUAD）的发生。未加DOX时，肿瘤不会发生，实现时间可控的肿瘤诱导。
2. 巨噬细胞清除系统：LysM-Cre + LSL-DTR
LysM-Cre：溶菌酶M（LysM/Lyz2）启动子驱动Cre重组酶表达，主要在髓系细胞（包括单核细胞、巨噬细胞） 中具有活性。
LSL-DTR：在Rosa26位点携带一个LoxP-Stop-LoxP（LSL） 序列，其后是白喉毒素受体（DTR） 基因。在Cre重组酶作用下，Stop序列被切除，DTR得以表达。
工作原理：在LysM-Cre;LSL-DTR小鼠中，巨噬细胞会表达DTR。当腹腔注射白喉毒素（DT） 后，DT与DTR结合，特异性地杀死表达DTR的巨噬细胞，实现可诱导的巨噬细胞清除。
3. 系统整合：在四转基因小鼠中，DOX饮水诱导肺部肿瘤发生，DT注射清除巨噬细胞。两个系统独立工作，研究者可以按需组合，精确控制肿瘤诱导和巨噬细胞清除的时间窗口。
模型应用场景
该模型主要用于研究巨噬细胞（尤其是肺泡巨噬细胞，AMs）在EGFR突变驱动的肺癌中的作用。典型实验设计如下：
时间窗口：通常在DOX诱导肿瘤4–6周后开始给予DT清除巨噬细胞，以观察其对已形成肿瘤的影响。
模型核心用途：
验证巨噬细胞的促瘤功能：通过DT清除巨噬细胞，观察肿瘤负荷（如肺干重） 是否下降。
解析巨噬细胞亚群：可结合流式细胞术，分析清除后肺泡巨噬细胞（AMs）和间质巨噬细胞（IMs） 的动态变化。
机制研究：可进一步探究巨噬细胞通过GM-CSF等因子与肿瘤细胞的互作。
模型局限与注意事项：
•清除特异性：LysM-Cre在中性粒细胞中也可能有一定活性，DT清除可能不仅限于巨噬细胞，需在实验中通过流式细胞术验证清除效率。
•DT毒性：DT本身对小鼠具有剂量依赖性毒性，超过100 ng/g体重的剂量可能对小鼠产生毒性，需优化注射方案。
•巨噬细胞再增殖：DT清除后，巨噬细胞可能通过局部增殖而快速再填充，需密切监测清除的持续时间。
•基因背景：常用C57BL/6背景，不同背景可能影响肿瘤发生和免疫应答。
•遗传品系来源：LysM-Cre（JAX #004781）和LSL-DTR（JAX #007900）均来自Jackson Laboratory，TetO-EGFRL858R（MGI:3690078）和CCSP-rtTA（MGI:2445707）也有标准品系可供获取。
总结来说，这一四重转基因模型通过DOX诱导肿瘤和DT清除巨噬细胞两个独立可控的系统，为在体内动态研究巨噬细胞在EGFR突变肺癌中的功能提供了强有力的工具。此外，还可以使用荷兰Liposoma巨噬细胞清除剂ClodronateLiposomes氯膦酸盐脂质体鼻腔给药清除肺泡巨噬细胞，进一步验证实验数据。
